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地塞米松检测试剂盒如何正确使用

人阅读 发布时间:2022-10-18 16:59

地塞米松检测试剂盒如何正确使用

地塞米松检测试剂盒使用说明书
(酶联免疫法)

 1 原理及用途
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测肌肉组织、牛奶等样品中的地塞米松(Dexamethasone,DEX),试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时,加入标准品或样品溶液,样本中的地塞米松药物和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗地塞米松药物抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,样本吸光度值与其所含地塞米松药物含量成负相关,与标准曲线比较即可得出样本中地塞米松药物的残留量。
2 技术指标
2.1 试剂盒灵敏度:0.1ppb(ng/ml)
2.2 反应模式:25℃,30min~30min~15min
2.3 检测下限:
肌肉组织…………………………………0.2ppb
牛奶………………………………………0.5ppb
饲料………………………………………1ppb
2.4 交叉反应率:
地塞米松…………………………………100%
 2.5 样本回收率:
组织、牛奶、饲料……………………80%±15%
3 试剂盒组成
酶标板……………………………96孔
标准液:各1ml
0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb
高标准液(红盖):100ppb…………1ml
酶标记物(红盖) …………………11ml
抗体工作液(蓝盖) ………………5.5ml
底物液A(白盖)……………………6ml
底物液B(黑盖)……………………6ml
终止液(黄盖)………………………6ml
20×浓缩洗涤液(白盖)……………40ml
2×复溶液(黄盖) …………………50ml
说明书…………………………………1份
盖板膜…………………………………1张
自封袋…………………………………1个
4 需要的器材和试剂
4.1 仪器:酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平(感量0.01g)
4.2 微量移液器:单道20µl-200µl,100µl-1000µl、多道300µl
4.3 试剂:乙酸乙酯、NaOH、正己烷
5 样本前处理
5.1 样本处理前须知:
实验器具必须洁净并使用一次性吸头,以避免污染干扰实验结果。
5.2 配液:
配液1:2M溶液
称40gNaOH加去离子水混匀溶解,定容至500ml。
配液2:0.3M溶液
取2M溶液75ml,加去离子水定容至500ml。
配液3:复溶液
将2×复溶液用去离子水2倍稀释(1份复溶液加1份去离子水),用于样本的复溶,复溶液在4℃环境可保存一个月。
配液4:工作洗涤液
将浓缩洗涤液20倍稀释(1份洗涤液加19份去离子水)。
5.3 样本前处理步骤:
5.3.1 肌肉组织样本处理方法
1)称取均质后的样本2±0.05g于50ml离心管中,加入8ml乙酸乙酯,振荡5分钟,室温4000转/分离心10分钟;
2)取上层液体4ml至50ml离心管中,加入4ml 2M 氢溶液,振荡5min,室温4000转/分离心10分钟;
3)取2ml上层有机相至10ml洁净干燥玻璃试管中,在50-60℃下氮气吹干;
4)加入1ml复溶液溶解干燥的残渣,振荡2min;
5)取100μl进行分析。
    样本稀释倍数:2    检测下限:0.2ppb
5.3.2 牛奶样本处理方法
1)取200ul牛奶样本,加入0.8ml复溶液工作液充分混匀;
2)取100μl进行分析。
    样本稀释倍数:5    检测下限:0.5ppb
5.3.3 饲料样本处理方法
1)称取碾碎后的饲料样本1±0.05g于50ml离心管中,加入4ml 0.3M 溶液,振荡混匀,再加入8ml乙酸乙酯,振荡5分钟,室温4000转/分离心10分钟;
2)取1ml上层有机相至10ml洁净干燥玻璃试管中,在50-60℃下氮气吹干;
3)加入1ml正己烷溶解干燥的残渣,再加1ml复溶液,振荡2min;
4)室温4000转/分离心5分钟;
5)去上层,取下层水相100μl进行分析。
    样本稀释倍数:8    检测下限:1ppb
6 酶联免疫试验步骤
    将所需试剂从4℃冷藏环境中取出,置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解,每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架,将不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
6.1 编    号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
6.2 加样反应:加标准品或样本100µl/孔到各自的微孔中,然后加抗体工作液50µl/孔,轻轻振荡5秒混匀,25℃避光反应30分钟。
6.3 洗    涤:小

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