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信帆生物-Western Blot(WB)实验代测服务一步到位

人阅读 发布时间:2022-02-28 13:40

蛋白质免疫印迹法 (Western Blot ) ,简称WB ,是指通过SDS-PAGE胶将不同分子量的蛋白质分离开,然后将目标蛋白转移到载体(PVDF)膜上,利用抗原抗体的特异性结合,用特异性的一抗结合目标蛋白,用HRP标记的二抗结合一抗,再加以ECL发光液显色,检测组织或者细胞内某种或者某些特异性蛋白质的表达。蛋白质免疫印迹是做蛋白质分析的一种常规技术,常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分析,还可以用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。
 

技术应用
通过抗原抗体反应对目标蛋白的表达进行半定量检测,还可用于蛋白-蛋白、蛋白-DNA和蛋白-RNA相互作用的后续分析。WB作为一种方便可靠的研究工具,将与谱和蛋白质芯片等技术一起在蛋白质组时代发挥重要作用。

为什么各个抗体都要进行 WB预实验?
对WB结果有决定性影响的因素是抗体的效价和如果正确使用手中的抗体。正确使用抗体可以保证抗体效价不被过分的拮抗,与抗原更加有效的结合,从而获得特异性和非特异性背景之间差异的最大化。每一个抗体都有其特性,因此我们必须通过WB预实验获得背景小,非特异性条带少的实验结果。

预实验的内容如下:
1)确定一抗的稀释比例和孵育时间;
2)选择合适的封闭液及封闭时间;
3)调节合适的上样量,使内参条带灰度值趋于一致。

抗体使用有哪些注意事项?
使用抗体前需仔细阅读说明书,了解抗体的保存条件以及不同用途下的推荐稀释比例。较高浓度的抗体(>0.5mg/mL)通常性质更稳定,受生产工艺和成本控制等因素影响,不同品牌的抗体的浓度也不相同,所以购买时应注意比较,经验不足的实验者往往被抗体的体积迷惑,要注意相同质量下低浓度的抗体体积反而更大。

实验流程:
蛋白提取-制胶-电泳-转膜-封闭-一抗孵育-二抗孵育-化学发光-结果分析;
送样运输要求:新鲜组织,100mg以上,干冰运输。细胞量为5*10^6以上,收集细胞沉淀,干冰运输。

WB相关检测样本准备及要求

WB检测:(检测某种蛋白的有无及含量差异)
组织样本:
1、 组织取样时洗净血污,液氮或干冰速冻-80℃保存,保存时间3个月内为宜,时间过长蛋白可能降解。
2、标本量100mg(黄豆大小)以上。骨头、脂肪蛋白含量较少组织需提供200-300mg。

细胞样本:
1.活细胞汇合度70%-80%,装满新鲜培养基,不透气培养瓶,封口膜封口常温运输;
2.细胞沉淀;
3.细胞上清,干冰运输。

其他特殊要求:    
如客户提供试剂盒,要求提取特殊蛋白,需要提前和实验室沟通,并且准备好实验样本,保证样本量充足。

信帆生物对质量的控制涵盖生产、放行、市场质量反馈的全过程,包括原辅料、包装材料、工艺用水、中间过程及成品的质量标准和分析方法的建立、取样、检验和产品稳定性考察和市场不良反馈样品的复核等工作,确保产品的精确度、稳定性。我们确保销售给客户的产品是能够符合质量标准,适合客户要求的产品。

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