超微量 Na +K+–ATP 酶测试盒的测定意义

（测组织、培养细胞）

 

二、样本的前处理：
1、组织的前处理：（组织匀浆上清液的制备参考实验方法学）
准确称取组织重量，按重量（g）：体积(mL)=1:9 的比例，加入 9 倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500 转/分，离心 10 分钟，取上清液（即 10%的匀
浆上清液），再用生理盐水 10 倍稀释成 1%，同时用考马斯亮蓝试剂测定组织蛋白（试剂本所有售）。如果预试结果太高，再将 1%的组织匀浆稀释成不同浓度再进行预试后再决定取样浓度。
2、培养细胞的前处理：将培养细胞消化，离心，弃上清，留下层细胞，每管加 0.2～0.3mL 生理盐水或匀浆介质制备成 10 7 /cm3 细胞悬液，即 10 7 /mL，再进行破碎。破碎细胞的方法有三种：①、用匀浆器匀浆。②、用超声粉碎器粉碎。③、反复冻溶 3 次（第③种方法有时会影响酶活力）。制备好的细胞悬液不需要离心，同时用考马斯亮兰试剂测定组织蛋白（试剂本所有售）。再将细胞匀浆液稀释成不同浓度进行预试，根据预试结果决定取样浓度。
[注 1]：在测试加样前要摇匀后取样。
[注 2]：不可用磷酸盐缓冲液或含磷的试剂作为样本匀浆或稀释样本。

[注 3]：预试结果将绝对吸光度值（A 测定—A 对照）控制在 0.2 左右为宜。

 

 

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超微量 Na +K+–ATP 酶测试盒的测定意义

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