SP免疫组化试剂盒，免疫组化试剂盒。上海信帆销售免疫组化实验，省去你实验的各种麻烦，一站式采购齐全。免疫组化试剂盒包含了二抗，显色液，链酶亲和素等试剂，为你的免疫组化实验助力，欢迎来电咨询！

SP(小鼠/兔IgG)-POD Kit 说明书
产品内容：
封闭液（正常山羊血清） 10ml
3% H2O2 10ml
Bio-羊抗小鼠/兔IgG 浓缩液200ul
链酶亲和素-POD 浓缩液100ul
稀释液         30ml
20×DAB 显色液A 1ml
20×DAB 显色液B 1ml

保存：
如果长时间不使用，请将所有试剂存放于-20℃，如经常使用，可将封闭液，3% H2O2 和20×DAB
显色液B 存放于2-8℃以方便使用。

SP免疫组化试剂盒，免疫组化试剂盒

产品说明：
本试剂盒适合于一抗为小鼠/兔IgG 的免疫组化实验DAB 显色。
SP 试剂盒是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲
和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲
和素是一个碱性蛋白质（PI=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，
对组织和细胞的非特异吸附很低，因此基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。
操作步骤:（以石蜡切片为例）
1. 切片常规脱蜡至水(三次二甲苯，三次乙醇)。
2. 3% H2O2 室温处理5-10 分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3 次。
3.可选步聚：
a、热修复抗原，将切片浸入0.01M 柠檬酸钠缓冲液（PH6.0），电炉或微波炉加热至沸腾后断电，
间隔5-10 分钟后，反复1-2 次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1-2 次。
b、酶消化，滴加消化液，37℃10 分钟，PBS（pH7.2-7.4）洗涤2-3 次。
c、跳过此步，直接进入下一步。
4. 滴加封闭液，室温20 分钟。甩去多余液体，免洗。
5. 用稀释液将一抗按一定比例稀释（稀释后的一抗4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。
滴加稀释的一抗37℃ 孵育1 小时左右或20℃ 2 小时左右，也可4℃过夜。PBS（pH7.2-7.4）洗涤3
次，每次2 分钟。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳
性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时
间。）
6． 根据用量，用稀释液将Bio-羊抗小鼠/兔IgG 浓缩液按1:100 稀释成工作液(1ml 稀释液加入10ul
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Bio-羊抗小鼠/兔IgG 浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗小鼠/兔IgG 工作液，
20-37℃ 孵育30 分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗涤3 次，每次2 分钟。
7．根据使用量，用稀释液将链酶亲和素-POD 浓缩液按1:100 稀释成工作液(1ml 稀释液加入10ul
链酶亲和素-POD 浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加链酶亲和素-POD 工作液，20-37℃，
30 分钟。PBS （pH7.2-7.4）洗涤4 次，每次5 分钟。
8．DAB 显色：根据用量，用PBS（pH7.2-7.4）配制，按1ml PBS 加入50ul 20×DAB 显色液A，加
入50ul 20×DAB 显色液B 。充分混匀后滴加到切片上。室温显色，镜下控制反应时间，一般在5-30
分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9．苏木素轻度复染。脱水，透明，封片。显微镜观察。
对于细胞爬片，固定后，PBS 漂洗两次，再用0.5% Triton X-100 室温孵育20 分钟，PBS 漂洗
两次，3% H2O2 处理15 分钟；PBS 漂洗两次，接上述第4 步。
对于冰冻切片，固定后，PBS 漂洗两次，接上述第二步。
注意事项：
如果染色背景过高，在SP 反应之后，DAB 显色之前，用加有0.01—0.02% TWEEN-20 的PBST
（pH7.2-7.4）洗涤切片4 次，PBS 洗2 次，然后DAB 显色。

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