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公司新闻

SP免疫组化试剂盒,免疫组化试剂盒

发布时间:2017-05-26 14:48 |  点击次数:

SP免疫组化试剂盒,免疫组化试剂盒。上海信帆销售免疫组化实验,省去你实验的各种麻烦,一站式采购齐全。免疫组化试剂盒包含了二抗,显色液,链酶亲和素等试剂,为你的免疫组化实验助力,欢迎来电咨询!

SP(小鼠/兔IgG)-POD Kit 说明书
产品内容:
封闭液(正常山羊血清) 10ml
3% H2O2 10ml
Bio-羊抗小鼠/兔IgG 浓缩液200ul
链酶亲和素-POD 浓缩液100ul
稀释液         30ml
20×DAB 显色液A 1ml
20×DAB 显色液B 1ml

保存:
如果长时间不使用,请将所有试剂存放于-20℃,如经常使用,可将封闭液,3% H2O2 和20×DAB
显色液B 存放于2-8℃以方便使用。

SP免疫组化试剂盒,免疫组化试剂盒


产品说明:
本试剂盒适合于一抗为小鼠/兔IgG 的免疫组化实验DAB 显色。
SP 试剂盒是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲
和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有极高的亲和力,亲
和素是一个碱性蛋白质(PI=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,
对组织和细胞的非特异吸附很低,因此基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。
操作步骤:(以石蜡切片为例)
1. 切片常规脱蜡至水(三次二甲苯,三次乙醇)。
2. 3% H2O2 室温处理5-10 分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3 次。
3.可选步聚:
a、热修复抗原,将切片浸入0.01M 柠檬酸钠缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,
间隔5-10 分钟后,反复1-2 次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2 次。
b、酶消化,滴加消化液,37℃10 分钟,PBS(pH7.2-7.4)洗涤2-3 次。
c、跳过此步,直接进入下一步。
4. 滴加封闭液,室温20 分钟。甩去多余液体,免洗。
5. 用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。
滴加稀释的一抗37℃ 孵育1 小时左右或20℃ 2 小时左右,也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3
次,每次2 分钟。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳
性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时
间。)
6. 根据用量,用稀释液将Bio-羊抗小鼠/兔IgG 浓缩液按1:100 稀释成工作液(1ml 稀释液加入10ul
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Bio-羊抗小鼠/兔IgG 浓缩液混匀,此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗小鼠/兔IgG 工作液,
20-37℃ 孵育30 分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3 次,每次2 分钟。
7.根据使用量,用稀释液将链酶亲和素-POD 浓缩液按1:100 稀释成工作液(1ml 稀释液加入10ul
链酶亲和素-POD 浓缩液混匀,此工作液4℃可保存一周)。滴加链酶亲和素-POD 工作液,20-37℃,
30 分钟。PBS (pH7.2-7.4)洗涤4 次,每次5 分钟。
8.DAB 显色:根据用量,用PBS(pH7.2-7.4)配制,按1ml PBS 加入50ul 20×DAB 显色液A,加
入50ul 20×DAB 显色液B 。充分混匀后滴加到切片上。室温显色,镜下控制反应时间,一般在5-30
分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9.苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。
对于细胞爬片,固定后,PBS 漂洗两次,再用0.5% Triton X-100 室温孵育20 分钟,PBS 漂洗
两次,3% H2O2 处理15 分钟;PBS 漂洗两次,接上述第4 步。
对于冰冻切片,固定后,PBS 漂洗两次,接上述第二步。
注意事项:
如果染色背景过高,在SP 反应之后,DAB 显色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN-20 的PBST
(pH7.2-7.4)洗涤切片4 次,PBS 洗2 次,然后DAB 显色。

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